本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检测。  一、规范性引用文件  《GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法》  二、仪器:  1、高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。  2、微量注射器:50 μL。  3、漩涡混合器。  4、高速离心机:最高转速不低于6 000 r/min。  5、分析天平:精度0.1 mg。  6、超声波清洗器。  7、金属试验筛:0.5 mm。  8、有机相微孔滤膜:0.22 μm   三、液相色谱操作条件  推荐的液相色谱条件如下:  a)色谱柱:250 mm×4.6 mm(i.d.)不锈钢柱,内装C18、 5.0 μm填充物(或具有同等效果的色谱柱);b)流动相:流动相及梯度洗脱条件见表1;  c)流速:1.0 mL/min;  d)柱温:30 ℃;  e)检测波长:氯吡脲、烯效唑和脱落酸的最佳检测波长为258 nm,萘乙酸最佳检测波长为280 nm;f)进样体积:10 μL。  上述操作参数是典型的,可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整,以期获得最佳效果。典型的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准溶液液相色谱图四、标准曲线的绘制  分别移取脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液(4.8)0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL、1.00 mL和2.00 mL至10 mL容量瓶中,甲醇(4.1)定容,配制成浓度为10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的混合标准工作溶液。按照色谱条件(6.3.1)浓度由低到高的顺序进行测定,以色谱峰峰面积为纵坐标,对应的浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。

本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中10种植物生长调节剂[复硝酚钠(2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5硝基邻甲氧基苯酚钠)、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、氯吡脲、烯效唑、多效唑、2,4-D]的检测。 规范性引用文件 《GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法》 一、相关仪器 1、液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源和数据处理机。 2、漩涡混合器。 3、高速离心机:最高转速不低于6000r/min。 4、分析天平:精度0.1mg。 5、金属试验筛:0.5mm。 6、超声波清洗器。 7、有机相微孔滤膜:0.22μm。 二、质谱操作条件: a)电离方式:电喷雾电离,氯吡脲、烯效唑、多效唑采用正离子模式(ESI+),复硝酚钠、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、2,4-D采用负离子模式(ESI-); b)检测方式:多反应监测模式(MRM); c)离子源温度:550 ℃; d)雾化气:氮气,流速8 mL/min; e)气帘气:氮气,流速25 mL/min; f)碰撞气:氮气;流速50 mL/min; g)毛细管电压:22 V; 三、标准曲线的绘制 分别移取一系列混合标准工作溶液(4.18),按照浓度由低到高的顺序依据仪器条件(6.3.1)进行测定,以色谱峰峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。 四、定性 按6.3.1的仪器条件对标准工作溶液和样品溶液进行测定,如果样品溶液中色谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间一致;而且样品溶液中监测离子的相对丰度比与相当浓度的标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表2的规定范围,则可判定样品中存在相应的目标成分。

淫羊藿为小檗科植物,主要功效为补肾阳,强筋骨,祛风湿。因此,淫羊藿甙在补肾壮阳的保健食品中常是主要的功能因子。关于淫羊藿甙的测定,保健食品方面尚无检验方法,药典对其甙类的检测是薄层色谱法,需铺板,试样萃取,减压蒸馏浓缩,最后用分光光度法测定,既繁琐误差又大。所以本文利用高效液相色谱法对保健食品中淫羊藿甙的测定进行了研究。1 材料与方法1.1 仪器: Shimadzu LC-6A高效液相色谱系统;SPD-6AV紫外检测器;C-R2A数据处理系统;C18柱,CSF-3A超声波发生器。1.2 试剂: 标准溶液:精密称取淫羊藿甙标准品5.0 mg,用甲醇(优级纯)溶解并定容为10.0 mL,此溶液浓度为0.5 mg/mL。该溶液用甲醇稀释5倍,即为0.1 mg/mL的标准使用液。2 仪器条件 流动相:甲醇+水;流速0.8 mL/min;检测波长270 nm,0.02AUFS。柱温40℃,流动相过0.45 nm滤膜。3 测定方法3.1 试样处理[6]:取粉碎的固体试样4.0 g,加入70%乙醇40 mL,超声30 min后过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣,收集滤液,定容至50 mL,为试样处理液。3.2 测定:取上述试样处理液1 mL,用70%乙醇稀释至5 mL,过0.45μm滤膜,进样5μL,在上述仪器条件下分析,测定峰面积。 取标准使用液5μL,在同一色谱条件下分析,以相对保留时间定性,峰面积定量。3.3 计算x=(h1×C×V×5×100)/(h2×m) x试样中淫羊藿甙的含量,mg/100 g;h1试样峰高或峰面积;C标准溶液浓度,mg/mL;V试样定容体积,mL;h2标准溶液峰高或峰面积;m试样量,g。3.4 色谱图 4 结果与讨论4.1 波长的选择 对淫羊藿甙标准溶液,进行紫外光谱扫描,其最大吸收波长为270 nm,因此选择270 nm进行检测具有较高灵敏度。4.2 流动相配比的选择 增加流动相中甲醇的比例,会使出峰时间缩短,但由于保健食品成分复杂,为排除杂质干扰,当流动相配比为55+45时,保留时间为12.45 min,淫羊藿甙峰的周围无其它干扰。如图所示。4.3 方法的线性范围及最小检出限 分别配制浓度为0.025,0.050,0.075,0.100,0.125 mg/mL淫羊藿甙标准溶液,在同样色谱条件下分析,以浓度对峰面积作校正曲线,得线性回归方程和相关系数分析为y=3822.399x+755,r=0.9999。本方法最小检出限为0.03μg。表1 精密度试验结果 n=6 mg/100 g试样号 1 2 3 4 5 6 RSD %1 0.0127 0.0123 0.0129 0.0121 0.0122 0.0127 0.0125 2.62 0.0091 0.0110 0.0101 0.0103 0.0105 0.0100 0.0102 6.23 0.0115 0.0116 0.0111 0.0113 0.0113 0.0114 0.0114 1.54.4 准确度 根据试样测定步骤,做两个浓度加标回收试验,每个浓度做6个平行样,低浓度平均回收率为97.8%~102.4%,高浓度平均回收率为97.5%~101.8%。4.5 精密度 选择3种含淫羊藿甙的保健食品,分别测定6次,结果见表1。4.6 稳定性试验 从表2可以观察出方法的稳定性非常好,这与淫羊藿甙本身化学性质比较稳定有关。表2 稳定性试验结果 第一次 第二次 第三次 第四次 RDS %1999.4.20 1999.4.21 1999.4.22 1999.6.40 试样1 0.0127 0.0124 0.0126 0.0125 1.02试样2 0.0091 0.0101 0.0100 0.0091 5.7 由于此类保健食品,成分复杂,有时含有其它甙类、黄酮类、叶绿素、防腐剂等,本实验进行了空白试验,对未加淫羊藿甙的同种试样进行了上述方法的测定,结果无干扰,见图谱。 5 结论 应用高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿甙,方法简便,干扰少,精密度及准确度均较满意,有较强的实用性。

乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定一.名词简介1.三聚氰胺理化性质三聚氰胺:英文名“melamine”,简称三胺,学名三氨三嗪,别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式:C3N6H6、C3N3(NH2)3;分子量:126.12;物理性能:白色结晶粉末,无毒,无味;相对密度:1570kg/m³;熔点:在常压下,354℃分解;升华温度:300℃;溶解性:能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳,水溶液呈弱碱性。化学性能:三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料,显弱碱性,能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐;在强酸或强碱液中,三聚氰胺发生水解,胺基逐步被羟基取代,生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物;三聚氰胺与甲醛反应制成树脂,三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料,防火耐热且有很高的稳定性,用于生产塑料、地板砖,厨房用具,防火纤维,商业滤膜,胶水和阻燃剂。2.乳制品是指以生鲜牛乳及其制品为主要原料,经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类、乳粉类、含乳饮料类、炼乳类、乳脂肪类、干酪类、乳冰淇淋类和其他乳制品类等。二.高效液相色谱法测定1.原理试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液,经高效液相色谱测定,根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。2试剂方法中所用试剂,除另有规定外,均为分析纯试剂,水为GB/T6682-2008中一级用水,溶液为水溶液。2.1磺基水杨酸。2.2柠檬酸。2.3辛烷磺酸钠:高效液相色谱离子对试剂。2.4乙腈:色谱纯。2.5盐酸。2.660g/L磺基水杨酸:称取60g磺基水杨酸用水定容至1L。2.70.1mol/L盐酸:量取8.3mL盐酸用水稀释至1L。2.8缓冲液:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/L。2.9三聚氰胺标准品:已知含量大于99%。2.10标准储备液:称取三聚氰胺标准品0.01g,用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液。2.11标准系列:将标准储备液用0.1mol/L盐酸逐级稀释至0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL的系列标准溶液。3仪器成套性3.1高效液相色谱仪3.1.1P3000型高压输液泵3.1.2UV3000紫外检测器3.1.3Rehodyne手动进样阀(20μl)3.1.4CXTH3000色谱工作软件3.1.5ODS250mm×4.6mm,5m3.1.6分析启动工具包3.1.7溶剂托盘3.1.8试剂包3.1.9保护柱和柱芯3.1.10真空固相萃取装置3.2溶剂过滤器3.3超声波清洗器3.4柱温箱3.5高速离心机:转速》4000r/min3.6旋涡混匀器3.7分析天平:感量0.1mg4样品处理4.1固态乳制品称取1.0g左右试样,加入0.1mol/L盐酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后加入60g/L磺基水杨酸6mL~8mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.2液态乳制品称取15g左右试样,加入60g/L磺基水杨酸3mL~4mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.3饲料称取1.0g左右试样,将样品用研钵充分碾碎混匀,加入0.1mol/L盐酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后加入60g/L磺基水杨酸6mL~8mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。5测定步骤5.1色谱条件5.1.1色谱柱:ODS或C8,250mm×4.6mm,5m。5.1.2流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15。5.1.3流速:1.0mL/min。5.1.4柱温:40℃。5.1.5波长:240nm。上述色谱条件是典型的,可根据实际情况做具体调整。如果分离效果不理想,将水相改为:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/L,加3mL三氯乙酸,配制成1000mL溶液,流动相用氨水调PH值3.9到3.95。5.2测定5.2.1标准曲线制备将标准系列0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL分别进样20L,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标作图,制作标准曲线。5.2.2样品测定取制备好的试样溶液进样20L,进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。三聚氰胺的标准样品色谱图见图1,液态奶样品色谱图见图2,奶粉样品色谱图见图3。图1标样色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图2液态奶样品色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图3奶粉样品色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm6结果计算6.1计算试样中三聚氰胺的含量按式计算:C×VX=————………………………………………………m式中:X—样品中三聚氰胺含量,mg/kg;C—从标准曲线上查出的含量,g/mL;V—定容体积,mL;m—称样量,g。平行测定结果用算术平均值表示,结果保留三位有效数字。本文参考以下方法:HPLC-UV检测方法三聚氰胺在传统的C18柱上保留很

有机磷农药是目前我国使用量较大的杀虫剂之一,主要应用于粮食、蔬菜和水果上。虽然有机磷农药属非持久性农药,但其大量使用必然会对环境产生负面影响,对人、蓄构成严重威胁.长期食用受污染的粮食、蔬菜,是导致癌症、动脉硬化、心血管病、胎儿畸形、死胎、早天、早衰等疾病的重要原因;绝大多数人食用有害蔬菜后并不马上表现出症状,但毒物在人体中富集,时间长了便会酿成严重后果。我国近年来发生的农药中毒事故大多数集中于高毒有机磷农药,以对硫磷最多,部分地区占80%左右。因此,建立有效的检测农副产品中有机磷农药残留量的方法具有重要意义。有机磷农药的测定常采用气相色谱法,可是,大部分有机磷农药具有很强的极性和热不稳定性,给气相色谱分析带来一定的难度。本研究采用高效液相色谱法同时测定蔬菜中甲基对硫磷、乙基对硫磷和甲拌磷。 1 实验部分 1.仪器与试剂 仪器.LC-1OAT高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括:SPD-10AVP/10APVP紫外-可见检测器,LC-1OA高压溶液输送泵和N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);BF2000氮气吹干仪(北京八方世纪科技有限公司);FS-1电动匀浆机(金坛市富华仪器有限公司).试剂.甲基对硫磷标准品(99.0%,国家农药质检中心(沈阳));乙基对硫磷标准品(99.0%,天津农药质检中心);甲拌磷标准品(98.0%,天津农药质检中心);甲醇(色谱纯,北京化工厂);乙腈(色谱纯,天津市博迪化工有限公司);实验用水为重蒸馏水。 1.2色谱条件 色谱柱为Shim-Pack:VP-ODS(150L×4.6);流动相为V甲醇:V水=85:15;流速为1.0mL/min.进样量20uL,以峰面积外标法定量。 1.3 标准溶液的配制 准确称取一定量的农药标准品,用甲醇制成一定浓度的储备液,再逐级稀释储备液,得质量浓度分别为0.10、0.50、1.0、1.5、2.0mg/L的标准混合液。 1.4 样品处理方法 取1000g的白菜,取可食部分,用干净的纱布擦去样品表面的附着物,采用对角线分割法,取对角部分,将其切碎.准确称取3份25g试样,分别加入50.0mL的乙腈,在匀浆机中匀浆2min后用滤纸过滤,滤液收集到装有5g氯化钠的100mL的具塞量筒中,盖上塞子,剧烈震荡1min,静至10min,使乙腈与水相分层.将含乙腈的有机层经盛有3g的无水硫酸钠的漏斗过滤于100mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,从中吸取10mL溶液,再用氮气吹干仪吹至近干后用甲醇溶解定容至5mL,经0.45mu;m滤膜过滤后进样。 2 结果与讨论 2.1 测定波长的选择 分别将3种农药的标准储备液依次用UV一1100紫外/可见分光光度计进行波长扫描,测得3种农药的最大吸收波长分别为甲基对硫磷265nm,乙基对硫磷259nm,甲拌磷为238nm.综合考虑3种组分的最大吸收值及灵敏度,最终选择紫外检测波长为250nm。 2.2 流动相组成对分离度的影响 实验考察了甲醇-水的不同比例对甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷分离的影响。实验结果表明,随着甲醇含量的增加,其分离度逐渐减小,当甲醇:水=85:15时,各组分仍能够得到很好的分离,且分析所用的时间较短。 2.3 工作曲线和检出限 取1.3节的标准溶液,在优化的色谱条件下进行分析,得到标准色谱图。同一样品平行测定5次,取其平均值,绘制工作曲线,以峰面积A对浓度c(mg/L)回归计算,结果表明线性关系良好,回归方程、相关系数和检测限。 2.4 精密度实验 取质量浓度为1.5mg/L的混合标准品,在上述色谱条件下,连续进行7次测定,经计算得到测定甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷的精密度RSD分别为4.6%、3.2%、2.9%。 2.5 回收率测定 在已知含量的白菜样品中分别加入不同浓度的有机磷农药标准品,按ldquo;1.4rdquo;节方法制备样品液进行测定,扣除样品中原有的农药含量,求出加标回收率,结果可知,甲基对硫磷回收率为95.44%~98.33%;乙基对硫磷回收率为93.33%~101.67%;甲拌磷回收率为94.00%~97.78%。 2.6 样品分析 在白菜中加入上述3种农药作为模拟蔬菜样品,按1.4节方法处理样品后按上述色谱条件进行测定。得到样品色谱图如图所示。甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷的残留量分别为1.75、2.13、1.83mg/kg。