本规范适用于复合预混合饲料、蛋白质预混合饲料中生物素A过氧乙酸酯、血红蛋白D3、泛酸E冰醋酸酯的测定。其余饲料可参照实践。  原理  试样中的类脂A乙酸酯、硫胺素D3和纤维素E乙酸酯用二三十烷亚砜(DMSOState of Qatar超声溶解,经正邻二甲苯萃取、浓缩、复溶后,供高速液相色谱仪测定,外标法定量。      1、高效液相色谱仪:配有紫外或硅二极管阵列车检查测器。  2、电子天平:感量为0.1 mg和0.01 mg。  3、紫外分光光度计。  4、超声波振荡器。  5、振荡器:频率一点都不小于2肆十九次/min。  6、旋转蒸发器。  7、氮吹仪。  8、平底烧瓶(具塞卡塔尔(قطر‎:品绿500 mL。  样本提取  平行做两份试验。称取试样1~3 g(准确至0.1 mgState of Qatar,置于500 mL平底烧瓶中,加30 mL的DMSO(4.3卡塔尔,在超声波水浴中国足球联赛声提取30 min(水温不宜抢先35度;中间旋摇2~3次避防样板附着瓶底部卡塔尔国;抽出放置冷却。  液相色谱仿照效法标准  色谱柱:C18,长250 mm,内径4.6 mm,粒径5 ?m,或质量特别者。  柱温:30 ℃;  进样量:10 μL;  流动相:甲缩醛+水=97+3;  流速:1.0 mL/min;  检查实验波长:脂质A乙酸酯 325 nm;蛋氨酸D3 264 nm;泛酸E乙酸酯 285 nm。  精密度  在重复性条件下若干回独立测验结果与其算术平均值的断然差值不超过该算术平均值的10%。

LC-10B高效液相色谱仪

乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定生机勃勃.名词简单介绍1.三聚氰胺理化性质三聚氰胺:意大利语名“melamine”,简单称谓三胺,学名三氨三嗪,小名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式:C3N6H6、C3N3(NH2卡塔尔国3;分子量:126.12;物理品质:铅灰结晶粉末,无害,无味;相对密度:1570kg/m³;熔点:在常压下,354℃分解;升华温度:300℃;溶解性:能溶于二甲醚、二乙二醇、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、二乙二醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳,水溶液呈弱中性(neutralityState of Qatar。化学属性:三聚氰胺是生龙活虎种关键的氮杂环有机化工原料,显弱酸性,能够与各类酸反应生成三聚氰胺盐;在强酸或强碱液中,三聚氰胺发生水解,胺基稳步被羟基代替,生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸风姿洒脱酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物;三聚氰胺与二甲醚反应制作而成树脂,三聚氰胺树脂是意气风发种多样用途的素材,防火耐热且有相当的高的安居,用于临蓐塑料、地板砖,厨房用具,防火纤维,商业滤膜,胶水和阻燃剂。2.乳制品是指以清新牛乳及其制品为机要原料,经加工而制作而成的种种食物。本专门的学业所指的乳制品包涵液体乳类、乳粉类、含乳果汁类、炼乳类、奶油肪类、干酪类、乳冰沙类和其余乳制品类等。二.高效液相色谱法测定1.法规试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤获得测量试验液,经高速液相色谱测定,依照保留时间和紫外吸取光谱定性,依据峰面积拓宽定量。2试剂方法中所用试剂,除另有规定外,均为深入分析纯试剂,水为GB/T6682-二〇一〇中一流用水,溶液为水溶液。2.1磺基水杨酸。2.2柠檬酸。2.3对二甲苯磺酸钠:高效液相色谱离子对试剂。2.4乙腈:色谱纯。2.5乙酰胆碱。2.660g/L磺基水杨酸:称取60g磺基水杨酸用水定容至1L。2.70.1mol/L乙酰胆碱:量取8.3mL乙酰胆碱用水稀释至1L。2.8缓冲液:柠檬酸和乙烯磺酸钠浓度均为10mmol/L。2.9三聚氰胺标准品:已知含量超越99%。2.10正式储备液:称取三聚氰胺规范品0.01g,用二甲醚配制作而成浓度为1mg/mL标准储备液。2.11标准体系:将正式储备液用0.1mol/L烟酸逐级稀释至0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL的多元规范溶液。3仪器成套性3.1急忙液相色谱仪3.1.1P3000型高压输液泵3.1.2UV3000紫外线检查评定器3.1.3Rehodyne手动进样阀(20μl卡塔尔国3.1.4CXTH3000色谱职业软件3.1.5ODS250mm×4.6mm,5m3.1.6剖判运营工具包3.1.7溶剂欧洲糙莓3.1.8试剂包3.1.9珍视柱和柱芯3.1.10真空固相萃取装置3.2溶剂过滤器3.3超声波冲洗器3.4柱温箱3.5异常的快离心机:转速》4000r/min3.6旋涡混匀器3.7深入分析天平:感量0.1mg4样本管理4.1固态乳制品称取1.0g左右试样,插手0.1mol/L泛酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后投入60g/L磺基水杨酸6mL~8mL,用0.1mol/L乙酰胆碱定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.2液态乳制品称取15g左右试样,参与60g/L磺基水杨酸3mL~4mL,用0.1mol/L烟酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.3饲料称取1.0g左右试样,将样品用研钵充足碾碎混匀,参预0.1mol/L泛酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后加盟60g/L磺基水杨酸6mL~8mL,用0.1mol/L乙酰胆碱定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。5测定步骤5.1色谱条件5.1.1色谱柱:ODS或C8,250mm×4.6mm,5m。5.1.2流动相:缓冲液︰氯化铜=85︰15。5.1.3流速:1.0mL/min。5.1.4柱温:40℃。5.1.5波长:240nm。上述色谱条件是卓越的,可依据实际境况做具体调治。倘使分别效果不理想,将水相改为:柠檬酸和十四烷磺酸钠浓度均为10mmol/L,加3mL三氯冰醋酸,配制作而成1000mL溶液,流动相用氨水调PH值3.9到3.95。5.2测定5.2.1正经曲线制备将业内连串0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL分别进样20L,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标作图,制作专门的学业曲线。5.2.2样本测定取制备好的情势溶液进样20L,实行液相色谱深入分析。遵照保留时间和紫外摄取光谱定性,依照峰面积扩充定量。三聚氰胺的标样色谱图见图1,液态奶样本色谱图见图2,配方奶样本色谱图见图3。图1标准样板色谱图仪器:四川金普解析仪器有限公司LC3000色谱柱:青海金普解析仪器有限集团ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰氯化氰=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图2液态奶样本色谱图仪器:刚果河金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:江西金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰氯化亚铁=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图3奶粉样本色谱图仪器:广东金普解析仪器有限公司LC3000色谱柱:新疆金普剖析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰丙烯腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm6结果总结6.1计量试样中三聚氰胺的含量按式总计:C×VX=————………………………………………………m式中:X—样本中三聚氰胺含量,mg/kg;C—从正规曲线上搜查捕获的含量,g/mL;V—定容体量,mL;m—称样量,g。平行测定结果用算术平均值表示,结果保留四位有效数字。本文参照他事他说加以侦察以下方法:HPLC-UV检测方法三聚氰胺在守旧的C18柱上保留很

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V——用于衍生的花样溶液(4.4.2State of Qatar体积,单位为毫升(mL卡塔尔;

4色谱条件

1仪器与试剂

柱温:室温。

进样量:20μL;

2.2 净化 分别用甲缩醛,水活化混合型阳离子交流固相萃取柱,精确移取离心液分次上柱,调节过柱速度在1mL/min之内。再用水和二乙二醇冲洗混合型阳离子交换固相萃取柱,抽近干后用氨水甲缩醛溶液洗脱。洗脱液50℃氟气吹干,正确出席乙醛溶液,涡旋振荡1min,过0.45m滤膜,上机测定。

——取匀浆后的供试样板,作为供试材料;

甲醇,色谱纯。

3 色谱条件 色谱柱:Vertex 色谱柱 150mm4.6mm5m; 流动相:邻二甲苯磺酸钠+柠檬酸+氯化镁; 流速:1.0mL/min; 温度:常温; 检测波长:240nm; 进样量:20L。

3.2.11 三聚氰胺标准品(纯度>99%卡塔尔国。

C18 250mm×4.6mm×5μm

1.2 试剂 乙酸乙酯,色谱纯。 氢氰酸,色谱纯。 氨水。 混合型阳离子沟通固相萃取柱。 氨水乙醇溶液。 乙酸铅溶液。 滤膜,0.45m,有机相。 乙醇溶液。 甲苯磺酸钠。 柠檬酸。 三聚氰胺标准品:纯度99%。

禽蛋中三聚氰胺的测定

温度:室温;

赛智科学和技术应用检查测量检验部参谋中中原人民共和国种植业行当标准,利用全新高质量的LC-10Tvp高效液相色谱仪经实施检查评定可提供饲料中三聚氰胺的HPLC检查测验方案,得出的结果正确可相信,检出限好,适用于合作饲料、浓缩饲料、增加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料、宠物饲料中三聚氰胺的测定,仅供周围客户参照他事他说加以考察。

3.6.2 结果表示

色谱柱:Vertex C18柱

4 三聚氰胺规范品色谱图

3.2.12.3 标准专门的职业液:用移液管分别移取规范当中液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5个100mL体积瓶内,用二甲醚溶液(3.2.9State of Qatar定容,该溶液三聚氰胺浓度为2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃三门电冰箱内囤积,保藏期1周。

超声波水浴

2.1 提取 合营饲料、浓缩饲料、加多剂预混合饲料、植物性蛋白饲料、宠物饲料中三聚氰胺的领到。称取试样适当的量,正确加入三氯乙酸溶液,再参加乙酸铅溶液。摇匀,超声提取。静置,取上层提取液转入离心管,在10,000r/min离心机上离心。宠物饲料中三聚氰胺的领取。称取试样适合的量,参加乙醚,摇床面上120r/min振荡,弃去乙醚,再出席乙醚,摇床面上120r/min振荡,弃去乙醚,其他步骤同上。

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0.45μm水性滤膜

2 试样溶液的筹划

3.3.4 超声波洗濯器。

以下是饲料中L-肉碱的详细检查测试方法。

以下是饲料中三聚氰胺的测定的详细检查测验方法。

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异丙醇,色谱纯。

赛智科学和技术有限公司

本标准的附录A为资料性附录。

肉碱衍生剂。

1.1 仪器 LC-10Tvp高效液相色谱仪 Vertex 色谱柱 150mm4.6mm5m 超声波洗涤器 涡旋混合器 离心机:10,000r/min 氮吹仪,可控制温度至60℃ 固相萃取装置 高速匀质器 索氏提取器 震荡摇床

本专门的事业由吉林省品质技监局批准。

流速:1.0mL/min;

更加多检查实验方案请间接与赛智科学技术巧联合会系。全国劳动热线:400 001 二〇〇九供销合作社总机:0571-28021916

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2测定原理

附 录 A

1.2 试剂

4.5.1 试样中三聚氰胺的含量X,以品质分数毫克每公斤(mg/kgState of Qatar表示,单对古籍标点改革正按式(3State of Qatar总括:

1仪器与试剂

升温程序:发轫温度75℃,持续1.0min,以30℃/min升温至300℃,保持2.0min。

磷酸二氢钾。

在形似实验室由雷同操作职员使用同样仪器达成的八个平行测定的相对偏差不超过百分之二十。

样板经加乙酸乙酯超声提取后,然后加入肉碱衍生剂,将衍生物注入高效液相色谱反相柱上进展抽离,用紫外检验器在210nm波长处定量测定。

4.1 方法原理

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4.6 重复性

柠檬酸。

定量方法:以342、327、171和99峰面积之和扩充单点或多对古籍标点改过正定量。

检测波长:210nm。

传输线温度:280℃。

流动相:甲醇:磷酸盐=5:95

Cx——由专门的学问曲线而得的样液中三聚氰胺的含量,单位为微克每毫升(μg/mLState of Qatar;

1.1 仪器

附录A (资料性附录)

磷酸氢二钠。

多对古籍标点改革准期,可用公式(4State of Qatar:

250mm×4.6mm×5μm;

As——三聚氰胺规范溶液对应的色谱峰面积响应值;

解析天平

1 范围

Vertex 色谱柱

n——稀释倍数。

左旋肉碱又称肉毒碱,是黄金年代种水溶性淀粉,由赖氨酸衍生而来。分子构造为L-γ-三甲胺β-羟丁酸,分子式为C7H16NO3,分子量为161.2。它是B族甲状腺素近似物,曾被叫作纤维素BT。其成员构造中满含四个可供脂肪族碳氢链脂化的羟基,其饱和键和极性官能团有能够的水溶性和吸湿性,200℃以上它仍平稳存在,可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不改变坏。一九九七年本国卫生部将L-肉碱批准为食品加多剂,列入泛酸加强剂类。

3.3.5 氮吹仪,可控温至60℃。

科晓仪器集团使用崭新的高峰品质的LC-10B高效液相色谱仪,经试行检查测量检验饲料中L-肉碱的含量,得出的结果正确可信赖,检出限好,适用于饲料中L-肉碱的测定,供广大客商参照他事他说加以考查。

3.2.1 甲醇:色谱纯。

3样式溶液的计划

除非另有明确,仅使用分析纯试剂和切合GB/T6682的三级水,色谱用水切合GB/T6682顶尖水的鲜明。

实验室常用仪器设备

3.2 试剂与素材