本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检测。  一、规范性引用文件  《GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法》  二、仪器:  1、高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。  2、微量注射器:50 μL。  3、漩涡混合器。  4、高速离心机:最高转速不低于6 000 r/min。  5、分析天平:精度0.1 mg。  6、超声波清洗器。  7、金属试验筛:0.5 mm。  8、有机相微孔滤膜:0.22 μm   三、液相色谱操作条件  推荐的液相色谱条件如下:  a)色谱柱:250 mm×4.6 mm(i.d.)不锈钢柱,内装C18、 5.0 μm填充物(或具有同等效果的色谱柱);b)流动相:流动相及梯度洗脱条件见表1;  c)流速:1.0 mL/min;  d)柱温:30 ℃;  e)检测波长:氯吡脲、烯效唑和脱落酸的最佳检测波长为258 nm,萘乙酸最佳检测波长为280 nm;f)进样体积:10 μL。  上述操作参数是典型的,可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整,以期获得最佳效果。典型的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准溶液液相色谱图四、标准曲线的绘制  分别移取脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液(4.8)0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL、1.00 mL和2.00 mL至10 mL容量瓶中,甲醇(4.1)定容,配制成浓度为10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的混合标准工作溶液。按照色谱条件(6.3.1)浓度由低到高的顺序进行测定,以色谱峰峰面积为纵坐标,对应的浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。

禽蛋中三聚氰胺的测定

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反义寡核苷酸即反义核酸,其核苷酸序列可与靶RNA或靶DNA互补,抑制或封闭基因的转录和表达,或诱导RnaseH识别并切割mRNA,使其丧失功能。反义核酸药物是药理学的新领域或新革命[1],是目前所知最精确、高效及最具广泛意义的调控特异基因表达的潜在策略,它既可以作为研究工具,用于对一些特定蛋白和基因的生理功能的研究,也可作为治疗药物用于癌症、感染性疾病等许多疾病的治疗。然而反义寡核苷酸的功能在很大程度上取决于其稳定性、生物利用度及与靶基因结合特性,通过特定的化学修饰可以改变这些物理化学特性,从而增加抗病毒、抗肿瘤和其他特定基因的表达抑制活性。以硫代磷酸酯为骨架修饰的硫代寡核苷酸是最广泛研究的反义核酸,现在进入临床的所有ODN几乎都是PS-ODN[2],它具有抗核酸酶水解、良好的亲核性、方便的同位素标记等特点。

Determination of melamine in eggs

近日,生态环境部发布三项水质检测国家环境保护标准,其中,《水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法》和《水质 磺酰脲类农药的测定高效液相色谱法》是由市环境监测中心站主持制定,这两项标准均为首次发布。

常见的硫代修饰剂有Beaucage试剂和二硫化四乙基秋兰姆等,结构式见图1。然而反义核酸中残余的硫化剂对反义药物本身有副作用,对生物体也有一定毒性。因此,在反义寡核苷酸药物的质量控制中需要确定它们的残余量。1 实验部分1.1仪器与试剂 HP 5890气相色谱仪,配FID检测器,HP 3394自动积分仪,HP 5971高性能台式气相色谱-质谱联用仪,配有WILLY138谱库,ZabSpec高分辨磁质谱仪,PE 235高效液相色谱仪。 标准品B和T购自Sigma公司(纯度均大于99%),巯基乙醇为Fluka公司,其它试剂均为色谱纯。1.2分析条件 气相色谱条件:HP-1非极性柱(30mγTM0.52mmγTM 0.32 μm);柱温采用程序升温:初温150℃,保持3分钟,以10℃/分钟升温至250℃,保持10分钟;进样器温度250℃;检测器温度270;载气为高纯氮,流速1.2mL/min;分流比15:1;分流进样,进样量体积为1.0μL。 气相色谱-质谱条件:HP-5TA柱(30mγTM0.25mmγTM 0.25 μm);柱温采用程序升温:初温80℃,以15℃/分钟升温至250℃,保持10分钟;进样器温度250℃;检测器温度280℃;载气为高纯氦,流速32cm/min;柱头压11.5psi;分流进样,进样量1.0μL电离方式为电子轰击,接口温度170℃,传输线温度250℃,电子能量70eV,电子倍增器电压1.3eV,溶剂延迟3分钟。 高效液相色谱条件:反相色谱柱,流动相为V:V=70:30的溶液,流速1.0mL/min;检测波长220nm;柱温45℃,进样量50μL。1.3标准溶液的配制 精密称取SPAN lang=EN-US11.0mg的B置于10mL容量瓶中,用苯定容,配制成1.10mg/mL的标准储备液,逐级稀释至所需要的浓度。同样,将T配制成1.17mg/mL的标准储备液。1.4化学衍生化 取0.5mL的标准储备液,加入0.5μM的NH4HCO3缓冲液再加入浓度为1.114g/mL的巯基乙醇10μL,在55℃水浴中反应。每隔一小时采样150μL,立刻冷却至-20℃保存,总共采样6次。将得到的样品经反相HPLC和磁质谱检测。结果表明反应4h时,衍生化进行完全,并且试药与巯基乙醇的质量分数比为2:1时,衍生化效果最佳。2 结果与讨论2.1 气相色谱条件的优化2.1.1 溶剂的选择 分别用二硫化碳、三氯化碳、丙酮、二氯化碳、四氢呋喃、乙腈和苯作溶剂,样品在上述溶剂中都有良好的溶解性,但除乙腈和苯之外,在气相色谱图上都有溶剂脱尾现象和溶剂对进样针的浸润作用,故考察选用乙腈和苯作溶剂。又从峰形和测定重复性方面考察,苯比乙腈的使用效果好,因此,实验中选用苯作溶剂。2.1.2 色谱柱的选择 选用极性柱HP- INNOWax、中极性柱BP-225和非极性柱HP-1三种气相色谱柱进行实验,均可进行检测。但使用前二种色谱柱,色谱峰拖尾比较严重,因此会影响分析方法的精密度和线形范围。使用后一种色谱柱HP-1能够克服这一不足。2.1.3 柱温的选择 考察了恒温和程序升温二种情况,在分离度和最低检测限量方面,程序升温好于恒温,并经反复实验比较不同升温方式,确立最佳升温程序。同时,在选择初始柱温时,既要考虑能缩短分析周期,又要考虑被检测物的灵敏度。当该温度在100℃~150℃时,单位进样量的峰高基本不变,但当该值大于150℃时,色谱峰明显拓宽,峰高度显著降低。因此,初始柱温选择150℃比较合适。202 气相色谱-质谱的测定 将B和T的衍生化样品分别进行GC/MS全扫描分析,质谱图见图2和图3。由图2、图3可知,B和T的基峰分别为168和116。分别以m/z 168, m/z 116的离子作为特征目标监测离子,同时以保留时间及WILEY138谱库的检索结果对样品做进一步确证,确保结果准确可靠。2.3 检出限与线性范围 B和T标准品的色谱图见图4和图5。为了确定它们的最低检测限量和线性范围,对不同浓度的标准溶液进行分析,得到了不同进样量的色谱峰面积及峰高。以色谱峰高度是基线噪声高度的2倍作为标准计算最低检测限量,则B的最低检测限量为50mg/mL,T的最低检测限量为100mg/mL。两种硫化剂的线性回归方程如下:B:Y=14228X-248846,r=0.995;T: Y=13158X-343695,r=0.998其中X为进样量,Y为色谱峰面积,线性范围:150mg/mL-1100mg/mL。3.结语 反义寡核苷酸是一类新型药物,有关研究历史不长,特别是还未建立系统的药物质量控制标准与检验方法标准。测定反义寡核苷酸中残余硫化剂,由于课题工作量大,多步骤展开研究,因此,研究时间紧张。本课题研究了二类最常用硫化剂,尚有其它硫化剂未涉及,还有待继续研究。

2008-12-26发布 2009-01-01实施

制定国家环境保护标准,必须经过科学严谨的预研、立项、起草、审查、出版等多项程序。市环境监测中心站谭培功研究员及实验分析团队,历经数年艰苦探索,做了大量分析研究工作,认真听取了各方面的意见建议,与国际相关标准进行科学对比,梳理数据、把握规律、优化方法,终于完善了两项标准的实验和验证,编写了编制说明,起草标准文本,完成标准的制定。

四川省质量技术监督局 发布

以保护生态环境和保障人民身体健康为出发点和落脚点,市环境监测中心站通过主持制定国家环境保护标准,推进实行最严格的保护制度,为生态文明建设做出积极贡献。

目 次

《水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法》

前言

生态环境部印发国家环境保护标准《水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法》,自2019年9月1日起实施。

1 范围

内容节选如下:附全文

2 规范性引用文件

本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的高效液相色谱法。

3 方法1:高效液相色谱法

本标准为首次发布。

4 方法2:气相色谱质谱法

本标准自2019年9月1日起实施。

附录A (资料性附录)

警告:实验中使用的有机溶剂具有一定的毒性和挥发性,标准物质具有强致癌性,试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行,操作时应按要求佩戴防护器具,避免接触皮肤和衣物。

前 言

当取样体积为150ml,试样定容体积为2.0ml,进样体积为40μl时,方法检出限为0.006μg/L,测定下限为0.024μg/L。

本标准的附录A为资料性附录。

样品通过阳离子交换固相萃取柱,联苯胺被吸附,用乙酸溶液将联苯胺锁定在固相萃取柱上,用甲醇淋洗除去杂质,再用氨水甲醇溶液进行洗脱,洗脱液浓缩定容后,用具有荧光检测器的高效液相色谱分离检测。根据保留时间定性,外标法定量。

本标准按GB/T.1.1-2000《标准的结构和编写规则》和GB/T.1.2-2002《标准中规范性技术要素内容的确定方法》要求进行编制。

高效液相色谱仪:具荧光检测器。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

色谱柱:填料粒径为5μm,柱长15㎝,内径4.6mm的C18反相色谱柱,或其他等效色谱柱。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

样品瓶:500ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。

本标准由四川省畜产品安全检测中心负责起草。

微量注射器:10μl、50μl和100μl。

本标准起草人:廖峰﹑赵立军﹑李云﹑高庆军﹑林顺全﹑张静。

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禽蛋中三聚氰胺的测定

超声波清洗仪:输出功率在180W以上,工作频率为40kHz。

1 范围

固相萃取装置。

本标准规定了测定禽蛋中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GC-MS),其中GC-MS法为确证法。

一般实验室常用仪器和设备。

本标准适用于禽蛋中三聚氰胺的测定。

定性分析:根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性,可采用不同波长下的荧光强度比辅助定性,必要时用高效液相色谱-三重四极杆质谱法进行确认。

本标准中HPLC法最低定量限为2.0 mg/kg,GC-MS法最低定量限为0.05 mg/kg。

在本标准推荐的色谱参考条件下,联苯胺的标准色谱图见图 1。

2 规范性引用文件

定量分析:样品中联苯胺的质量浓度 ρ,按照公式进行计算:

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

式中:ρ——样品中联苯胺的质量浓度,μg/L;

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

ρ1——由校准曲线得到的试样中联苯胺的质量浓度,μg/L;

3 方法1:高效液相色谱法

V1——试样定容体积,ml;

3.1 原理

V——取样体积,ml;

取适量禽蛋,将蛋清和蛋黄搅拌匀浆后用三氯乙酸和醋酸铅溶液提取,提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解,用高效液相色谱仪进行测定。

D——稀释倍数。

3.2 试剂与材料

结果表示:当测定结果小于 1 μg/L 时,保留小数点后三位;当测定结果大于等于 1 μg/L 时,保留三位有效数字。

除非另有规定,仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682的三级水,色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。

实验中产生的有机废液应分类收集、集中保管,并做好相应标识,委托有资质的单位进行处理。

3.2.1 甲醇:色谱纯。

《水质 磺酰脲类农药的测定高效液相色谱法》

3.2.2 乙腈:色谱纯。

警告:实验中所用的有机溶剂和标准溶液具有一定的毒性和挥发性,试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行,操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤和衣物。

3.2.3 氨水:浓度25%~28%。

1适用范围

3.2.4 混合型阳离子交换固相萃取柱:60mg,3mL。

本标准规定了测定水中磺酰脲类农药的高效液相色谱法。

3.2.5 三氯乙酸溶液10g/L:称取10g三氯乙酸加水至1000mL。

本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中烟嘧磺隆、噻吩磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆、醚苯磺隆、氯磺隆、胺苯磺隆、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆和氯嘧磺隆等10种磺酰脲类农药的测定。

3.2.6 氨水甲醇溶液:量取5mL氨水,溶解于95mL甲醇中。

采用直接进样,进样体积为 50µl时,方法检出限为 0.006mg/L——0.009mg/L,测定下限为0.024 mg/L——0.036mg/L;采用液液萃取或固相萃取,取样 250ml,试样的定容体积为1.0ml,进样体积为 20μl 时,方法检出限为0.05µg/L——0.09µg/L,测定下限为 0.20µg/L——0.36µg/L。详见附录A。

3.2.7 乙酸铅溶液22g/L:取22g乙酸铅用约300mL水溶解后定容至1L。

2 规范性引用文件

3.2.8 滤膜:0.45μm,有机相。

本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件,其有效版本适用于本标准。